抗人肺癌单链抗体噬菌体库的构建及特异性单链抗体的鉴定

• 作者: 庞华 曹辉 李少林 李淑杰 樊春波 王树斌 罗弋
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 单链抗体噬菌体库 单链抗体 肺腺癌
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1155-1160
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3664字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人源噬菌体抗体库,并从中筛选出抗肺癌人源单链抗体.方法 提取肺癌患者癌旁淋巴结组织,通过RT-PCR扩增出重链可变区基因(V_H)和轻链可变区基因(V_L),再经剪切-重叠-延伸PCR(SOE-PCR)将V_H和V_L连接得到单链抗体(ScFv).将双酶切后的ScFv基因片段克隆入噬菌体表达载体pCANTAB5E,得到初级噬菌体抗体库.以肺腺癌细胞株A549为抗原对抗体库进行4轮筛选富集,鉴定抗体库性能.将得到的阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测.结果 成功构建噬菌体单链抗体库.经筛选富集,噬菌体收获率得到增加,第4轮是第1轮的115倍.随机选取10个克隆,通过ELISA法检测到其中7个与A549细胞呈阳性反应,阳性率为70%.SDSPAGE及ELISA检测证实得到人源抗肺癌单链抗体.结论 成功构建人源单链抗体噬菌体库,从中获得具有较高特异性的抗人肺癌单链抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李少林	重庆医科大学放射医学教研室	232	1134	14.0	22.0
2	庞华	重庆医科大学附属第一医院核医学科	53	201	7.0	11.0
3	罗弋	重庆医科大学放射医学教研室	19	69	4.0	6.0
4	曹辉	重庆医科大学放射医学教研室	9	20	3.0	4.0
5	李淑杰	重庆医科大学放射医学教研室	4	12	2.0	3.0
6	樊春波	重庆医科大学放射医学教研室	5	14	2.0	3.0
7	王树斌	包头市中心医院肿瘤科	5	11	2.0	3.0