抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建及鉴定

• 作者: 吴聪明 孟辉 张素霞 沈建忠 温凯 王战辉
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兽药 恩诺沙星 单链抗体 噬菌体展示技术 半抗原
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 118-124
• 分类号: S859.84
• 语种: 中文

摘要

本研究以兽药恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本、快速制备目的抗体提供新的途径.以恩诺沙星-鸡卵清蛋白(ENR-OVA)为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,取其脾细胞提取总RNA,并分别扩增全套抗体轻、重链基因,通过重叠延伸PCR技术,以编码柔性多肽(Gly3Ser)4的基因为接头,将轻重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13KO7对其进行超感染,构建噬菌体抗体库并进行富集、筛选和鉴定;构建了库容量约为2.2×106的抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库,并筛选出26株阳性克隆,为表达单链抗体、建立免疫检测方法奠定基础.