肿瘤特异单链抗体库的构建及肿瘤血管特异性结合抗体的体内筛选

• 作者: 田媛 秦玺 胡宝成 薛建红
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤血管 单链抗体 噬菌体展示 体内筛选
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-36
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 5100字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2007.01.007

摘要

目的:构建肿瘤组织特异的噬菌体呈现型单链抗体库,用噬菌体体内筛选与肿瘤血管特异性结合的单链抗体,为癌症的诊断和治疗奠定基础.方法:取食道癌、胃癌、脑癌、肺癌、脊髓瘤患者肿瘤组织,提取各肿瘤组织膜蛋白混合后免疫BALB/c小鼠,取鼠脾脏淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL), 经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TG1,在辅助噬菌体M13KO7的作用下,获得重组噬菌体单链抗体库.以人宫颈癌HeLa细胞致瘤裸鼠为实验模型,用所构建的单链抗体库进行了4轮特异抗体的体内筛选.挑取了24个PCR鉴定为阳性的单链抗体做免疫组化分析,将在HeLa致瘤的组织切片上呈阳性染色、而在对照的肾组织切片上没有阳性染色的单链抗体进行序列测定.结果:选用7株不同的肿瘤细胞系建立裸鼠致瘤模型,以HeLa细胞致瘤裸鼠成瘤效果最好.用所构建的库容量为1.6×106的单链抗体库对肿瘤血管特异结合抗体进行体内筛选,得到1株单链抗体ScFv(VH-linker-VL),命名为ScFvH1.结论:成功构建肿瘤特异单链抗体库,并用此抗体库筛选到与肿瘤血管结合特异性较好的单链抗体,为肿瘤的早期诊断和治疗提供了一条新的技术路线.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡宝成	军事医学科学院生物工程研究所	35	154	5.0	11.0
2	田媛	军事医学科学院生物工程研究所	8	24	3.0	4.0
3	秦玺	军事医学科学院生物工程研究所	7	15	3.0	3.0