表达H120 S基因膜外区段的重组鸡传染性支气管炎病毒的拯救

• 作者: 孙世琪 孙德惠 王海明 郭慧琛 韩世充 魏衍全
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性支气管炎病毒 重组病毒 纤突蛋白膜外区 H120株
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 668-674
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为探索以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV) Beaudette毒株为骨架表达H120纤突蛋白膜外区的可行性,本研究利用RT-PCR技术,扩增得到H120纤突基因膜外区段(1 302bp),将其置换到IBV Beaudette株全长cDNA克隆相应区段,构建了含有上述区段的重组IBV cDNA克隆BeauR-H120 (S1).然后直接将BeauR-H120(S1)作为DNA模板在体外转录出病毒基因组RNA,该转录产物电转入Vero细胞后48h收获细胞继续传代,直至第4代时出现合胞体,拯救获得一株重组IBV(rBeau-H 120(S1)).通过RT-PCR方法证明rBeau-H120(S1)基因组中包含有完整的H120纤突基因膜外区段.Western-blot试验证实rBeau-H120 (S1)的N蛋白有表达,表明重组病毒在Vero细胞内进行了增殖.经连续传代后测定rBeau-H120 (S1)的TCID50和EID50,结果显示,该重组病毒在Vero细胞中的滴度可达到105.90±0.22TCID50/mL,在9日龄SPF鸡胚中生长滴度为106.13±0.23EID50/mL.免疫保护实验表明,在接种重组病毒21d时,鸡群抗体阳性率达到90％,使用强毒株M41(103 EID50/只)攻毒时免疫保护率为85％.本研究采用反向遗传操作技术构建的重组IBV,为进一步研制IBV重组基因工程疫苗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭慧琛	中国农业科学院兰州兽医研究所	15	67	5.0	7.0
2	孙世琪	中国农业科学院兰州兽医研究所	13	50	4.0	7.0
3	孙德惠	中国农业科学院兰州兽医研究所	4	6	2.0	2.0
4	魏衍全	中国农业科学院兰州兽医研究所	4	1	1.0	1.0
5	王海明	中国农业科学院兰州兽医研究所	3	0	0.0	0.0
6	韩世充	中国农业科学院兰州兽医研究所	1	0	0.0	0.0