原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶及突变体的酶学特性

• 作者: 冯利伟 徐书景 李辉欣 赵宝华 郭姣洁 鞠建松
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 原玻璃蝇节杆菌 D-氨基酸氧化酶 定点突变 二级表观常数
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 酶和蛋白质
• 页码范围: 897-904
• 分类号: Q936
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.2014.08.007

摘要

[目的]研究原玻璃蝇节杆菌(DSM 20168)中D-氨基酸氧化酶的酶学特性.[方法]通过PCR从原玻璃蝇节杆菌(DSM 15035,20168)中克隆获得D-氨基酸氧化酶基因apdaao-1和apdaao-2,构建原核表达载体,以表达质粒pET-ApDAAO-2为模板,采用QuickChange Site-Directed Mutagenesis技术构建定点突变体,经过原核表达及纯化获得重组型和突变体酶蛋白,分析其酶学特性.[结果]通过原核表达及纯化成功获得了2个重组蛋白和4个突变体酶蛋白,SDS-PAGE检测显示其分子量均约为36 kDa;酶学特性分析表明,ApDAAO-2和突变体蛋白的最适反应温度为30℃;ApDAAO-2和T286A的最适反应pH范围为7.0-11.0,其它突变体为8.0-11.0;ApDAAO-2和突变体都具有较广泛的底物特异性,除T256K的最适底物为D-Phe外,其余均为D-Met;动力学参数测定结果显示,以二级表观常数k.at/Km表示,对于底物D-Met或D-Phe,ApDAAO-2和4个突变体的kcat/Km值均比ApDAAO-1和pKDAAO高数倍以上.[结论]ApDAAO-2及突变体具有比ApDAAO-1和pKDAAO更广泛的底物特异性和较高的催化效率,有一定的商业应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵宝华	河北师范大学生命科学学院	238	1801	20.0	28.0
2	徐书景	河北师范大学生命科学学院	22	63	5.0	6.0
3	鞠建松	河北师范大学生命科学学院	25	67	5.0	6.0
4	李辉欣	河北师范大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0
5	郭姣洁		5	5	2.0	2.0
6	冯利伟	河北师范大学生命科学学院	2	6	2.0	2.0