RNA干扰真核翻译延长因子1A1抑制肝癌Hep3B细胞的增殖

• 作者: 余新 刘秀霞 戈进 晏琛 温崇煜 邵江华
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 肝肿瘤 细胞增殖 RNA干扰 eEF1A1
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1016-1022
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11.471

摘要

目的:探讨RNA干扰真核翻译延长因子1A1 (eukaryotic translation elongation factor 1A1,eEF1A1)的表达对肝癌Hep3B细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制.方法:构建靶向eEF1A1的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)重组载体pGPU6/GFP/Neo-eEF1A1-shRNA,并将其转染至肝癌Hep3B细胞中,随后应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测eEF1A1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8 (cell counting kit 8)法检测细胞的增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,FCM法检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)的表达.结果:成功构建重组载体pGPU6/GFP/Neo-eEF1A1-shRNA,并获得稳定低表达eEF1A1的肝癌Hep3B细胞.pGPU6/GFP/Neo-eEF1A1-shRNA转染组Hep3B细胞中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(转染阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-NC的Hep3B细胞)和空白对照组(未转染的Hep3B细胞)(P＜0.01,P＜0.05).与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/Neo-eEF1A1-shRNA转染组Hep3B细胞的体外增殖能力和克隆形成能力明显下降(P＜0.05,P＜0.01),G1期细胞所占比例明显上升(P＜0.01),S期细胞所占比例明显下降(P＜0.05),cyclin D1和CDK4蛋白的表达水平明显下调(P＜0.05).结论:下调eEF1A1的表达可以抑制肝癌Hep3B细胞的增殖能力.