普通烟草八氢番茄红素脱氢酶基因的原核表达及表达谱分析

• 作者: 付强 任学良 林世峰 赵杰宏 邹颉 郭玉双 钟晓武
• 来源期刊: 植物遗传资源学报
• 关键词: 烟草 八氢番茄红素脱氢酶 原核表达 表达谱
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基因挖掘
• 页码范围: 838-843
• 语种: 中文
• DOI: 10.13430/j.cnki.jpgr.2014.04.023

摘要

基于NCBI数据库中本氏烟(Nicotiana benthamiana)的烟草八氢番茄红素脱氢酶PDS基因(ABE99707)的核苷酸序列,设计并合成特异性引物,以烟草栽培品种红花大金元叶片总RNA为模板,通过PCR方法获得了烟草NtPDS基因的cDNA片段.序列分析表明,该基因编码区为1749 bp,编码582个氨基酸,推测该蛋白等电点为7.53,理论分子量为65.04 kD.通过构建融合表达载体pET-32a-NtPDS,并转化大肠杆菌BL21(DE3),在37℃下经1 mmol/L IPTG诱导4h表达后,产生了以可溶性蛋白形式存在的NtPDS融合蛋白,并通过Western blotting验证融合蛋白获得表达.利用半定量RT-PCR技术进行组织表达模式分析发现,该基因在烟草的叶片、花和茎中均有表达,在根中没有表达.该结果为进一步研究烟草八氢番茄红素脱氢酶NtPDS的活性和生物学功能奠定了基础.