猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 伍锐 文心田 文翼平 曹三杰 袁明铭 邓静 黄小波
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 页码范围: 734-741
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的M蛋白进行截短原核表达并建立ELISA检测方法,设计引物扩增了含M基因抗原位点的基因片段,并构建了原核表达载体pET-32a-dM;将pET-32a-dM转化大肠杆菌Rosetta(DE3),获得了高效表达,表达产物大小为27 ku.蛋白免疫印迹结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性.以重组蛋白为抗原建立了间接ELISA检测方法,方阵滴定试验确定重组蛋白抗原的最佳包被质量浓度为13.07 μg/mL,血清稀释度为1∶80,酶标抗体1∶4 000稀释.阳性判定标准确立为D450nm≥0.3,反之则判为阴性.建立的ELISA与猪乙型脑炎病毒、胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌的阳性血清均无交叉反应,说明它特异性好.批内与批间重复性试验的平均变异系数分别为3.53％及6.82％,说明重复性较好.用该方法检测52份血清,特异性为87.5％,敏感性为90.0％,与商品化ELISA试剂盒的符合率为88.5％.本研究结果表明,截短表达的M蛋白可以作为诊断抗原,建立的ELISA方法完善后可用于PRRSV抗体的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	文心田		100	612	14.0	19.0
2	曹三杰		89	524	12.0	17.0
3	黄小波		52	188	9.0	11.0
4	伍锐		13	6	1.0	2.0
5	文翼平		16	32	3.0	5.0
6	邓静		3	0	0.0	0.0
7	袁明铭		1	0	0.0	0.0