RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

• 作者: 刘洪光 李俊 虞改雪 陶贵周 黄建华
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1 RNA干扰 细胞间黏附分子1 单核细胞趋化蛋白1 一氧化氮 RhoA/Rho激酶
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 891-896
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞.观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制.方法 针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干扰序列,测定滴度.转染人脐静脉内皮细胞96h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率.转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表达.结果 测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×1011 TU/L.转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少(P＜0.01).与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达(P＜0.05);与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用(P＜0.05).结论 干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用.本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶贵周	辽宁医学院附属第一医院心内科	102	386	11.0	15.0
2	李俊	辽宁医学院附属第一医院心内科	3	2	1.0	1.0
3	刘洪光	辽宁医学院附属第一医院心内科	6	8	2.0	2.0
4	黄建华	辽宁医学院附属第一医院组织工程重点实验室	6	3	1.0	1.0
5	虞改雪		3	3	1.0	1.0