猪CuZnSOD基因启动子的克隆鉴定及分析

• 作者: 张哲 张天阳 徐正刚 曾勇庆 杨云 石元 祝洪磊 陈伟
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 猪 CuZnSOD基因 启动子 双荧光素酶报告基因
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 213-222
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.130263

摘要

猪铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)是一种重要的抗氧化酶,其功能已被广泛研究,但CuZnSOD基因的转录调控尚不明确.为了研究猪CuZnSOD基因的核心启动子区域,并对其转录调控机制进行探讨,运用PCR方法从猪基因组克隆CuZnSOD基因5'上游调控区853 bp的片段,然后通过巢式PCR方法获得5'末端逐渐缺失的启动子系列片段,并将这些片段定向插入到荧光素酶报告基因表达载体(pGL3-Basic)中.瞬时转染小鼠胚胎细胞(NIH/3T3),利用双荧光素酶报告基因检测不同长度启动子活性.检测结果显示,在CuZnSOD基因5'上游调控区-87 bp和-266 bp处分别存在2个潜在转录起始位点,-383 bp～+67 bp启动区活性最强,进一步缺失分析发现-75 bp～-32 bp区域内含有猪CuZnSOD基因转录所必需的基础启动子序列,其中存在多个潜在的转录因子结合位点,研究结果提示这些转录因子结合位点可能是参与CuZnSOD基因转录的重要调控序列.