CD47重组质粒及其过表达重组大鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定

• 作者: 叶力文 李桂琼 柯大智 邓玮 陈庆伟
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD47 骨髓间充质干细胞 重组质粒 转染 表达
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1213-1217,1223
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4763字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.09.015

摘要

目的:构建CD47重组质粒并将其转染至大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs),建立稳定过表达CD47的BMMSCs,为研究干细胞治疗中逃避免疫监视的有关机制提供实验模型.方法:构建过表达CD47基因的质粒载体,转染至分离培养的大鼠BMMSCs,RT-PCR、Western blot分别检测干细胞CD47 mRNA、蛋白水平的表达,并完成功能检测.结果:成功构建了pYr-ads-4-ratCD47质粒,经酶切、测序结果表明pYr-ads-4-ratCD47重组质粒构建成功;RT-PCR、Western blot显示实验组转染至大鼠BMMSCs后CD47的mRNA和蛋白水平表达明显增高(P＜0.05);功能检测提示过表达CD47分子的BMMSCs成功逃避巨噬细胞吞噬.结论:经质粒介导可成功将大鼠CD47目的基因片段转染至大鼠BMMSCs,并能够在体外有效的过表达.