重组质粒pEGFP-BMP7的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

• 作者: 周海孝 戚孟春 李继华 胡静 邹淑娟
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 骨形成蛋白7 基因克隆 基因转染 间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 463-466
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 3051字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-1182.2005.06.001

摘要

目的体外构建重组质粒pEGFP-BMP7,并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.方法应用RT-PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段,并进行测序,随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性.通过脂质体介导重组pEGFP-BMP7瞬时转染大鼠骨髓间充质干细胞,确定转染效率,并通过RT-PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达.结果通过RT-PCR成功获得1.3kb的cDNA片段,该cDNA除756 bp处有一碱基从T突变成A外,其余序列与大鼠BMP7基因完全相符.重组质粒双酶切图谱显示,BMP7 cDNA被正确插入载体中.绿色荧光蛋白在大鼠骨髓间充质干细胞中早期瞬时转染效率可达33%.转染后RT-PCR和免疫细胞化学检测证实重组pEGFP-BMP7在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.结论成功构建重组真核表达质粒pEGFP-BMP7,并在大鼠骨髓间充质干细胞中得到表达,有助于应用BMP7行基因治疗,促进牵张成骨、骨痂形成和修复颅颌面骨缺损.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹淑娟	四川大学华西口腔医院正畸科	48	363	10.0	15.0
2	胡静	四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科学教研室	148	794	13.0	19.0
3	李继华	四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科学教研室	36	281	10.0	15.0
4	戚孟春	华北煤炭医学院口腔系	13	49	4.0	6.0
5	周海孝	四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科学教研室	5	25	3.0	5.0