随机突变提高单胺氧化酶活性

• 作者: 王志国 赖敦岳 邵建华 陈振明 陈雪君 马元慧
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 单胺氧化酶 易错PCR 酶活力 分子动力学模拟
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 工业酶改造与应用
• 页码范围: 109-118
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.130381

摘要

前期获得了一个对底物美西律具有一定活性的单胺氧化酶突变体A-1 (F210V/L213C).为进一步提高其酶活性,利用MegaWHOP PCR构建了库容约为104的随机突变库.筛选后获得了一个最优突变酶ep-1,比活力为A-1的189％.选择性测定结果表明,酶的对映体选择性有较大提高,E值由101提高到282;动力学常数测定揭示,酶催化效率有较大提高,kcat/Km由0.001 51 mmol/(L·s)提高到0.002 89 mmol/(L·s).和A-1酶相比,在所测定的11种胺类底物中,ep-1对其他7种底物的比活力有较明显提高,对其他4种底物的比活力变化不大.序列分析表明,ep-1的突变为T162A.分子动力学模拟结果提示,该突变主要通过修正通道氨基酸的二级结构和扩大活性口袋来发挥作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈振明	杭州师范大学生物催化研究室	9	58	4.0	7.0
2	陈雪君	杭州师范大学生命与环境科学学院	19	153	7.0	12.0
3	马元慧	杭州师范大学生命与环境科学学院	1	1	1.0	1.0
7	邵建华		1	1	1.0	1.0
8	赖敦岳	杭州师范大学生物催化研究室	2	4	1.0	2.0
9	王志国	杭州师范大学衰老研究所	1	1	1.0	1.0