Transwell 接触共培养促进单散iPSCs 生长及分化

• 作者: 刘庆 连瑞玲 郭晓令 郭永龙 陈建苏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 诱导多能干细胞 角膜内皮细胞 Transwell接触共培养
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1404-1409
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4217字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.08.012

摘要

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs，将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d，前3 d使用mTeSR1培养基，第4天开始用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ， qPCR ）、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ， ALP）染色，对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组，常规培养iPSCs组为对照组（一），非共培养单散iPSCs组为对照组（二）。结果：培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长，共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长，免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。 qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达，实验组与对照组（一）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。死活细胞染色显示，实验组死细胞明显减少，与对照组（二）比较差异有统计学意义（P＜0.01）。共培养14 d后，人iPSCs形态比较均一，呈多边形，体积增大，无明显克隆团块；ALP染色阴性；免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性，CD34和CD133表达阴性。 qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调，与对照组（一）比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性，使iPSCs形态上向内皮样细胞转化，表达部分CECs的标志。 Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈建苏	暨南大学附属第一医院眼科	62	385	12.0	16.0
10	郭晓令	暨南大学再生医学教育部重点实验室	6	13	2.0	3.0
11	刘庆	暨南大学附属第一医院眼科	10	41	3.0	6.0
12	郭永龙	暨南大学再生医学教育部重点实验室	6	15	3.0	3.0
13	连瑞玲	暨南大学附属第一医院眼科	2	3	1.0	1.0