产气荚膜梭菌α毒素和ε毒素的共表达及其免疫原性的研究

• 作者: 周继章 宫晓炜 张小英 曹小安 李兆才 郑福英 陈启伟 韩广伟
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 产气荚膜梭菌 a毒素 ε毒素 共表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 页码范围: 630-635
• 页数: 6页
• 分类号: S852.616.3
• 语种: 中文

摘要

利用PCR技术从D型产气荚膜梭菌标准株C60-2基因组中扩增出α毒素基因CPA和ε毒素基因ETX.然后将CPA、ETX分别插到双表达载体pETDuet-1上,成功构建重组质粒pETDuet-1-CPA-ETX.将重组质粒pETDuet-1-CPA-ETX转化入大肠杆菌BL21 (DE3)中,经IPTG诱导,菌体蛋白样品经SDS-PAGE分析,可见43 ku和34 ku两条特异性条带,表明插入基因得到了表达.Western-blot结果显示,共表达的α毒素和ε毒素蛋白均能与抗毒素抗体发生反应,具有很好的反应原性.用共表达的α、ε毒素蛋白免疫小鼠,可使其血清中产生较高浓度的中和抗体,且能抵抗D型产气荚膜梭菌培养液上清的攻击,免疫保护效果明显优于ε毒素蛋白单独免疫的保护效果.以上结果表明,本研究构建的产气荚膜梭菌α、ε毒素蛋白共表达体系可以用于D型产气荚膜梭菌毒素疫苗的制备,为预防多血清型病原的多价疫苗的研制提供了思路.