产气荚膜梭菌重组ε毒素突变体的免疫保护力评价

• 作者: 印春生 姚文生 康凯 彭小兵 朱真 李启红 杜吉革 薛麒 陈小云
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 产气荚膜梭菌ε毒素 突变 重组表达 毒力 抗原性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 777-785
• 页数: 9页
• 分类号: S852.616.3
• 字数: 7159字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.04.015

摘要

旨在获得产气荚膜梭菌e毒素的重组突变体,并评价其毒力及免疫原性.对已知的D型产气荚膜梭菌ε毒素编码基因进行了优化设计和人工合成,同时引入3个氨基酸点突变:第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,第106位组氨酸突变为脯氨酸.将该基因片段克隆至原核表达载体pET30a-(+)中进行表达,并纯化.利用Westernblot方法检测纯化蛋白质与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清的反应性,并检测其对小鼠的毒力.随后,以纯化的重组蛋白质免疫兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价.结果表明,e毒素的重组突变体为可溶性表达,通过灰度扫描,其表达量比例可达40％;该蛋白质能与D型产气荚膜梭菌ε毒素抗血清反应,小鼠安全试验显示,6.25×106 ng·kg-1的蛋白质仍无毒力;免疫兔血清对D型产气荚膜梭菌ε毒素的中和效价在一免后可达50～60最小致死量(MLD),二免后可达400～450 MLD;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组4/4死亡,免疫组得到保护.由此表明,产气荚膜梭菌重组e毒素突变体无毒力且保留了良好的免疫原性,为D型产气荚膜梭菌病新型疫苗的研制提供了重要的实验数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈小云		25	144	6.0	11.0
2	李启红		41	106	5.0	8.0
3	姚文生		38	164	5.0	12.0
4	康凯		46	153	6.0	10.0
5	印春生		30	127	5.0	11.0
6	彭小兵		35	163	6.0	12.0
7	杜吉革		11	6	2.0	2.0
8	薛麒		15	17	3.0	3.0
9	朱真		13	7	2.0	2.0