小鼠骨髓源耐受性树突细胞的分离培养及功能鉴定

• 作者: 付静静 吴华勋 张玲玲 李培培 李影 汪庆童 盛康亮 陈镜宇 魏伟
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 耐受性树突细胞 骨髓源 分离 功能鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 633-638
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 4433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.05.014

摘要

目的：建立小鼠骨髓源耐受性树突状细胞（CD11b＋F4/80＋TDCs）体外培养及功能鉴定方法。方法：以重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ rmGM-CSF ）和重组白介素4（ rmIL-4）体外诱导小鼠骨髓细胞分化为未成熟树突细胞（iDCs），收集第六天的细胞采用流式细胞术分离纯化CD11b＋F4/80＋TDCs。倒置显微镜动态观察细胞形态学变化，流式细胞术观察并分选CD11b＋F4/80＋TDCs，CD11b＋F4/80＋TDCs的耐受功能通过MHCⅡ类分子、CD83、IDO、TLR-2的表达及IL-10和TGF-β1细胞因子的产生进行评价。流式细胞术测定MHCⅡ类分子表达，免疫组化法测定CD83、IDO、TLR-2的表达，ELISA法测定IL-10和TGF-β1的水平，同时设LPS刺激诱导的成熟树突细胞（mDCs）作对照。结果：镜下可见新鲜分离的骨髓细胞呈圆形，体积小，2 d后，部分细胞形态发生改变，体积增大，细胞聚集成团，培养5～6 d，细胞集落增多，形态不规则。同时表面出现较多毛刺样突起。 CD11b＋F4/80＋TDCs 含量在23％左右，经流式分选后细胞纯度达到99％以上。与 mDCs 比较， CD11b＋F4/80＋TDCs低表达MHCⅡ和CD83，高表达IDO、TLR-2，并分泌IL-10和TGF-β1。结论：用小鼠rmGM-CSF和rmIL-4体外能成功诱导小鼠骨髓源CD11b＋F4/80＋TDCs，并且CD11b＋F4/80＋TDCs通过表达IL-10、TGF-β1、IDO和TLR-2显示耐受功能。