大鼠肝细胞球形体低温保存条件的初步探索

• 作者: 万志红 刘婉姝 刘鸿凌 朱冰 李晨 柳芳芳 游绍莉 臧红 荣义辉
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝细胞 低温保存 球形体,细胞 肝,人工
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 936-940
• 分类号: R329-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.11855/j.issn.0577-7402.2014.12.02

摘要

目的 探索有效的肝细胞球形体低温保存方法,促进生物人工肝及其他研究的应用.方法 采用两步法分离大鼠肝细胞,经无血清培养基(SFM)摇摆培养48h形成肝细胞球形体.将球形体继续培养(对照组),或置于4℃SFM,SFM+1mmol/L去铁胺(Def),SFM+ 1μmol/L环孢霉素A(CsA),SFM+1mmol/L Def+1μmol/L CsA保存液中24h或48h,继续培养4d或5d后观察低温保存后肝细胞球形体的存活率、超微结构变化,以及白蛋白和尿素合成情况.结果 Def和CsA能很好地保护球形体肝细胞,在4℃SFM+Def+CsA保存液中保存24h,肝细胞球形体功能、结构等变化及尿素合成水平与对照组比较差异无统计学意义,而单独放在SFM中进行低温保存后,细胞活性明显下降.在4℃保存48h后,球形体肝细胞超微结构发生明显变化,死亡细胞增多,但SFM+Def+CsA组和SFM+Def组细胞结构优于SFM组和SFM+CsA组,细胞存活率及尿素合成水平明显高于后两组(P＜0.05),但合成白蛋白量均处于较低水平,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低温状态下肝细胞球形体可保持良好的存活率和功能24h,低温保存能为细胞治疗提供良好的细胞材料.