针对人SND1基因两个AUG的细胞应激分析

• 作者: 付雪 何津岩 史雪彬 姚智 尹洁 张毅 张纬 杨洁 苏征 葛林 高星杰
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 重组融合蛋白质类 应激 质粒 基因表达 SND1 AUG 应激颗粒
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 625-629
• 页数: 5页
• 分类号: Q784|Q513
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.07.001

摘要

目的：针对人SND1基因2个蛋白翻译起始密码子AUG构建真核表达质粒pCMV-N-Flag-SND1-No1/2，并分析2个AUG在SND1应激颗粒形成中的作用。方法以SND1全长转录本为模板，PCR法扩增含BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点的目的基因SND1-No1/2，双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pCMV-N-Flag，以T4-DNA连接酶将两者连接成pCMV-N-Flag-SND1-No1/2重组质粒，然后将构建的重组质粒转染入HeLa细胞内，以Western印迹法检测Flag标签（DYKDDDDK）与SND1-No1/2的融合表达，最后以细胞免疫荧光实验检测在氧化应激状态下Flag-SND1-No1/2融合蛋白与内源性SND1应激颗粒的胞内共定位情况。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误，Western印迹结果检测到融合蛋白Flag-SND1-No1/2的表达；细胞免疫荧光结果显示Flag-SND1-No1/2均可与内源性SND1应激颗粒共定位。结论重组pCMV-N-Flag-SND1-No1/2质粒构建成功，SND1基因第1个AUG的缺失并不影响SND1应激颗粒的形成。