条件性 Sm ad4基因敲除鼠模型的建立和鉴定及初步表型

• 作者: 刘瑛 林丁
• 来源期刊: 国际眼科杂志
• 关键词: Smad4 条件性基因敲除 Le-Cre 报告基因 眼表型
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 瞯实验论著瞯
• 页码范围: 17-22
• 页数: 6页
• 字数: 4989字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3980/j.issn.1672-5123.2014.01.05

摘要

目的：利用Cre/LoxP系统建立眼组织特异性Smad4基因敲除小鼠并进行初步表型分析。<br>　　方法：通过PAX6启动子驱动的Cre转基因小鼠（ Le-Cre ）作为介导敲除的工具鼠，将其与 Smad4条件基因小鼠（Smad4fl/fl）结合获得Le-Cre特异性Smad4基因敲除小鼠或变异小鼠（ Le-Cre；Smad4fl/fl）。为了证实条件性基因敲除的特异性及有效性，通过PCR技术对小鼠或鼠胚进行了相关基因分析，特定组织绿色荧光蛋白（ GFP）的表达及Smad4蛋白的检测，同时利用ROSA26报导基因小鼠藉LacZ染色显示Le-Cre在眼组织的表达；并对Smad4变异小鼠的表型进行了观察。<br>　　结果：早在E10．0左右，鼠胚晶状体位置及眼周外胚层发现强荧光的GFP表达，表明Le-Cre明确出现在特定的靶组织。通过小鼠基因型分析，确定了小鼠或鼠胚是否携带Cre重组酶基因、Smad4条件性等位基因和/或Rosa报导基因，对小鼠晶体DNA的基因分析也证实Smad4基因在某些特异性眼组织内得到剔除。通过在Cre转基因小鼠导入报导基因，并籍LacZ染色对Cre重组酶的表达进行检测，显示了Cre重组酶的时空表达及其表达的组织特异性。 Smad4免疫组化染色显示，在正常发育胚鼠眼可见广泛的Smad4表达，早期主要存在于胞浆，随着胚眼发育向核内转移；而在Smad4变异鼠胚眼，结果表明 Smad4在Cre重组酶所表达的组织内缺乏表达。观察发现Smad4变异鼠可以顺利存活，但表现出眼球缩小、眼窝凹陷、眼睑畸形开放、闭合不能及眼周毛发脱失的外观。<br>　　结论：通过基因和蛋白水平的检测证实了Le-Cre；Smad4基因敲除鼠的建立及Smad4在变异小鼠中表达的缺乏。Smad4在眼组织的敲除导致了眼及附属器的明显异常，为深入了解眼球发育及Smad4对其影响的机制提供了一个可信的动物模型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林丁		14	34	3.0	5.0
2	刘瑛		1	0	0.0	0.0