mIL-21-hIgGFc融合蛋白在293 E细胞中的表达纯化及其对CD8＋T细胞表型的影响

• 作者: 刘明月 刘潇淇 易发平 王盛典 符少月 邢巧 黄启彬
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素21(IL-21) 293E细胞 表达纯化 CD8+T细胞
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 884-887,892
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.07.005

摘要

目的：在293 E细胞中表达小鼠IL-21-hIgGFc融合蛋白，并检测该蛋白对CD8＋T细胞表型的影响。方法：运用RT-PCR方法从BALB／c小鼠脾脏淋巴细胞扩增出 IL-21基因，插入到 PTT3-hIgGFc 载体上，获得重组质粒 PTT3-mIL-21-hIgGFc；用磷酸钙瞬时转染293E细胞，48 h和72 h后分别收集培养上清。培养上清经MOLLIPORE LabscaleTM TFF system浓缩后， Protein G琼脂糖柱纯化获得mIL-21-hIgGFc融合蛋白，再用ELISA和SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的含量和纯度。mIL-21-hIgGFc刺激P1A小鼠的CD8＋T细胞，72 h后，运用流式细胞术检测其表型改变情况。结果：重组质粒PTT3-mIL-21-hIgGFc经酶切和测序确定载体构建成功，ELISA检测表明293E细胞上清中含有787 ng／ml，SDS-PAGE结果显示得到了较纯的融合蛋白，纯化后获得500μg融合蛋白mIL-21-hIgGFc。融合蛋白mIL-21-hIgGFc 处理P1A小鼠CD8＋T细胞后，CD44low CD62Lhi CD8＋T细胞明显增多。结论：我们成功构建了PTT3-mIL21-hIgGFc重组质粒，在293E细胞中表达并纯化出mIL21-hIgGFc融合蛋白。 mIL21-hIgGFc能促进CD8＋T细胞向CD44lowCD62Lhi CD8＋记忆干细胞表型分化，这对于肿瘤过继免疫治疗方案的改进具有重要的参考意义。