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猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达
猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达
作者:
李华玮
王永芬
王老七
边传周
郑鸣
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
猪圆环病毒Ⅱ型
ORF3
原核表达
多抗血清
摘要:
为获得猪圆环病毒Ⅱ型 ORF3编码蛋白,研究该蛋白的特性及功能,根据 GenBank 数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物,利用 PCR 从病料基因组 DNA 中扩增 PCVⅡ河南地方株 ORF3,将其克隆至表达载体 pET 32a 中进行诱导表达,SDS PAGE 电泳检测重组蛋白表达情况,采用 Ni+NTA 亲和纯化表达产物,透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清,并采用 ELISA 和 Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示,PCR 扩增获得全长315 bp 的 ORF3,重组质粒经测序和双酶切证实构建正确;SDS PAGE 结果显示,ORF3能够在大肠杆菌中表达,产物的分子量约为30 ku,以包涵体形式存在;纯化的重组蛋白具有较好的抗原性,制备的多抗血清抗体效价达1∶12800以上,抗体特异性高,能与表达的 ORF3编码蛋白结合。成功克隆了 PCVⅡ河南地方株 ORF3并实现原核表达,获得纯化的重组 ORF3编码蛋白。
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文献信息
篇名
猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达
来源期刊
河南农业科学
学科
农学
关键词
猪圆环病毒Ⅱ型
ORF3
原核表达
多抗血清
年,卷(期)
2014,(10)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
123-126,140
页数
5页
分类号
S855.3
字数
4552字
语种
中文
DOI
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作者信息
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姓名
单位
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王永芬
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李华玮
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郑鸣
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边传周
44
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ORF3
原核表达
多抗血清
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研究来源
研究分支
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期刊影响力
河南农业科学
主办单位:
河南省农业科学院
出版周期:
月刊
ISSN:
1004-3268
CN:
41-1092/S
开本:
大16开
出版地:
郑州市农业路1号
邮发代号:
36-32
创刊时间:
1972
语种:
chi
出版文献量(篇)
8734
总下载数(次)
17
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