猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达与鉴定

• 作者: 高茵 李杰峰 张宁 王华健 赵志强 郑丽丽 陆安 田勇 杨威 徐丽娜
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 圆环病毒3型 Cap蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2023,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 44-48
• 页数: 4页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文

摘要

为获取猪圆环病毒3型衣壳蛋白(PCV3-Cap蛋白)，本试验参照PCV3 HBBD1810毒株(GenBank登录号：MK105924)的基因组序列信息合成cap基因，并将其克隆至原核表达载体pET-32a中，对重组质粒进行测序和双酶切鉴定后，将重组质粒转化Rosetta大肠杆菌，对最佳IPTG诱导浓度和诱导表达时间筛选，并对目的蛋白表达后的存在形式进行检测以及对纯化条件进行筛选，透析复性后利用鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体进行Western blot以验证目的蛋白的反应原性。结果显示，通过构建原核表达系统获得大小为42 kDa的PCV3-Cap蛋白；破菌处理后目的蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中；0.2 mmol/L IPTG 37℃下诱导培养8 h后蛋白表达量较高；在300 mmol/L咪唑洗脱时纯化出清晰条带；经过Western blot验证目的蛋白能够被鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体识别，具有良好的反应原性。结果表明，本试验成功构建了PCV3-Cap蛋白表达载体，成功表达PCV3-Cap蛋白，同时优化了表达和纯化条件，为PCV3亚单位疫苗的研制以及检测试剂盒的开发和研究提供了科学依据。