真核表达载体 pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响

• 作者: 付加朕 宋旭霞 张丽娜 王斌 胡明 邵光灿 钱冬萌
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素2 蜂毒肽 真核表达 神经胶质瘤细胞
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 生物治疗
• 页码范围: 1647-1651,1657
• 页数: 6页
• 分类号: R392.1
• 字数: 3745字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.12.013

摘要

目的：以pEGFP-N3为载体，构建融合基因M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala），检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响，为癌症的基因治疗提供实验基础。方法：通过PCR获得实验所需要的M-IL-2（88Arg，125Ala）基因片段，酶切后克隆入载体pEGFP-N3，构建M-IL-2（88Arg，125Ala）融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后，用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87，使用荧光显微镜观察转染效率，RT-PCR及Western blot检测M-IL-2（88Arg，125Ala）融合蛋白在U87细胞中的表达，CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果：经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实，重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）构建成功，经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达，CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论：真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88Arg，125Ala）构建成功，融合基因M-IL-2（88Arg，125Ala）可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响，为融合毒素M-IL-2（88Arg，125Ala）基因的进一步研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王斌	青岛大学医学院病原生物学教研室	240	1129	17.0	23.0
2	张丽娜	青岛大学医学院病原生物学教研室	30	75	5.0	7.0
3	钱冬萌	青岛大学医学院病原生物学教研室	108	353	10.0	13.0
4	胡明	青岛大学医学院病原生物学教研室	21	19	3.0	4.0
5	宋旭霞	青岛大学医学院病原生物学教研室	57	213	8.0	12.0
6	邵光灿	青岛大学医学院病原生物学教研室	3	2	1.0	1.0
7	付加朕	青岛大学医学院病原生物学教研室	1	0	0.0	0.0