人结直肠癌细胞Drosha基因敲除细胞模型的构建

• 作者: 宋伟 张晓东 李尚泽 李芸侨 王任先 王琳芳
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因敲除 Drosha 同源重组 结直肠癌
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: R735
• 字数: 2909字
• 语种: 中文

摘要

目的 为研究核酸酶Drosha与结直肠癌的关系,利用腺相关病毒(AAV)介导的染色体同源重组技术,构建Drosha基因敲除的HCT116结直肠癌细胞模型.方法 设计引物通过PCR扩增Drosha基因的同源臂,构建Drosha的AAV病毒打靶载体,通过病毒的包装、感染、抗生素新霉素(G418)药物筛选、PCR以及Western blot鉴定获得基因敲除阳性细胞株,通过Cre病毒感染去除抗性基因,最终建立敲除Drosha基因的结直肠癌细胞模型.结果 经过两轮打靶,分别将DNA双链上的Drosha基因去除并经Western blot鉴定,获得Drosha-/-阳性的HCT116细胞株.结论 通过AAV病毒介导的染色体同源重组技术,成功构建Drosha基因敲除的HCT116细胞系.