甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA干扰载体的构建

• 作者: 付三雄 周晓婴 张超 戚存扣 陈松
• 来源期刊: 农业科学与技术（英文版）
• 关键词: 甘蓝型油菜 丙酮酸激酶 RNA干扰 载体构建
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 分子生物学?组织培养
• 页码范围: 745-750
• 页数: 6页
• 字数: 1258字
• 语种: 英文

摘要

采用基因芯片技术，从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶（Pyruvate kinase, PK）基因。为构建甘蓝型油菜PK基因的RNA干扰(RNAi)载体，通过设计引物克隆了 PK基因长498 bp的 siRNA靶序列，连接到 pEASY-T1载体上，采用 NotI和XhoI酶切，酶切产物连接到本课题组新近改造的 RNAi 平台载体 pHurricane 的 NotI 和XhoI位点，通过多重 PCR 鉴定证实载体构建成功，然后将上述 PK基因反向重复框克隆到加入 napin启动子的 pCAMBIA1390表达载体相应的酶切位点上，构建具有种子特异性表达的PK基因的RNAi载体。限制性内切酶酶切证实载体构建成功，为进一步研究 PK基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础。