EPCR基因mRNA在人胃癌细胞系中的表达及其shRNA干扰载体内源性筛靶研究

• 作者: 刘庆茹 吴永平 嵇玮嘉 王庆苓
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮细胞蛋白C受体(EPCR)基因 胃癌细胞 短发夹RNA(shRNA) 转染条件
• 年，卷（期）: 2014,（26）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R735.2|Q782
• 字数: 3232字
• 语种: 中文

摘要

目的 检测人胃癌细胞株中内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein creceptor,EPCR)基因的mRNA表达水平,构建EPCR基因特异的短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并通过内源性筛靶实验检测EPCR mRNA表达,筛选出最佳的干扰靶序列.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)检测胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、HGC27、AGS)中EPCR mRNA和蛋白的表达,筛选出EPCR高表达的细胞株;设计5对EPCR基因特异性短发夹RNA(shRNA)干扰片段pGPH1/GFP/Neo-EPCR,用Lipofec-tamine 2000将pGPH1/GFP/Neo-EPCR转染入EPCR高表达的人胃癌细胞,以pGPH1/GFP/Neo空载体作对照;转染后通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率,选出最优质粒/脂质体比;转染后收集样本,采用RT-PCR及Western blot进行检测,筛选出有效的干扰片段.结果 EPCR在MGC803细胞中表达量最高;最佳质粒:脂质体比值为1μg:1μL;pGPH 1/GFP/Neo-EPCR-homo-555为最有效的干扰质粒.结论 成功筛选出针对EPCR基因特异的shRNA干扰载体,转染细胞后可下调EPCR的表达,为进一步研究EPCR的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴永平	徐州医学院病理教研室	56	299	7.0	14.0
2	王庆苓	徐州医学院病理教研室	29	61	4.0	6.0
3	刘庆茹	徐州医学院附属医院病理科	2	1	1.0	1.0
4	嵇玮嘉	徐州医学院病理教研室	3	2	1.0	1.0