质谱技术鉴定组织型激肽释放酶脑相关蛋白的研究

• 作者: 徐兵 朱健 王伟 苏敬敬 高秀兰
• 来源期刊: 现代中西医结合杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 组织型激肽释放酶 质谱技术 生物素 免疫共沉淀 Homer1b/c
• 年，卷（期）: 2014,（28）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 3079-3083,3089
• 页数: 6页
• 分类号: R-332
• 字数: 3992字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8849.2014.28.001

摘要

目的：采用质谱技术鉴定组织型激肽释放酶（ TK）的脑相关蛋白。方法将含全长、无信号肽的 TK基因质粒转染生物素标记 Neuro-2a细胞，细胞裂解液用兔源性抗 GFP抗体进行免疫共沉淀，特异性识别生物素的链亲和素-辣根过氧化物酶进行检测；将纯化的TK蛋白与大鼠脑组织抽提上清液作用后进行免疫共沉淀，裂解蛋白进行 SDS-PAGE电泳银染；将上述电泳所得差异蛋白切胶酶解打质谱后分析数据；RT-PCR检测缺氧再复氧的 Neu-ro-2a细胞内源性差异蛋白在 TK处理后的表达变化。结果 GFP-TK-full转染组较GFP-TK-no和 GFP转染组出现2条差异蛋白条带，分子量为64 kDa 和49 kDa；银染凝胶电泳显示，用抗 TK 抗体免疫共沉淀后有一分子量约为64 kDa 差异蛋白；质谱鉴定出19种差异蛋白；TK浓度依赖性上调 Homer1b/c和 Flotillin-2的 mRNA表达。结论质谱鉴定结果显示与 TK相关的脑蛋白分子量在40~65 kDa。TK的作用机制很可能与 Homer1b/c和 Flotillin-2有关。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王伟		17	168	7.0	12.0
2	徐兵		10	43	4.0	6.0
3	苏敬敬		9	75	3.0	8.0
4	高秀兰		6	8	2.0	2.0
5	朱健		2	14	1.0	2.0