利用慢病毒载体观察microRNA-194对人骨肉瘤细胞系U2-OS生物学特性的影响

• 作者: 卞娜 沙浩 王鑫 肖春 董川 蔡成魁 赵廷宝 韩康 颜世举
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: microRNA-194 慢病毒 骨肉瘤 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（23）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4401-4405
• 分类号: R738
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2014.23.001

摘要

目的:通过构建携带针对microRNA-194的shRNA载体及过表达载体,包装慢病毒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS,改变细胞内microRNA-194基因的表达水平,研究microRNA-194对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为探索microRNA-194作为骨肉瘤生物治疗的新靶点提供理论和实验依据.方法:PCR扩增pri-miR-194及miR-194-5成熟体,克隆于慢病毒载体plent-i GFP中,转染大肠杆菌感受态细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染人骨肉瘤细胞系U2-OS.进行MTT,流式,平板克隆等试验.结果:1.重组慢病毒表达质粒构建正确,过表达及抑制过表达重组慢病毒的滴度分别为1.5× 108 TU/ml及4×108 TU/ml;2.microRNA-194过表达的人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖速度,凋亡率及细胞周期相较于其它实验组都有明显变化(P＜0.01).结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制过表达慢病毒表达载体;miR-194的表达水平对U2-OS细胞的增殖和凋亡造成显著影响.microRNA-194可能成为骨肉瘤治疗的潜在新靶点,但该基因对骨肉瘤发生发展的作用及其机制尚待进一步研究.