朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析

• 作者: 冯晓姣 卜春亚 师光禄 彭博 李金玲 王有年 韩晶玉 高品
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 朱砂叶螨 乙酰胆碱酯酶 原核表达 纯化 半数抑制浓度
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 215-220
• 页数: 6页
• 分类号: Q786|S433.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1145.2014.08008

摘要

乙酰胆碱酯酶(AChE)在神经信号传导过程中起重要作用,是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶标.对朱砂叶螨AChE进行体外表达和纯化,并分析其活性,将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体pET-30a中,构建表达载体pET-30a/ace,转入表达菌株Escherichia coli BL21 (DE3)中,IPTG诱导高效表达;镍柱纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白;以纯化的螨AChE为抗原制备抗螨AChE特异性抗体;改良的Ellman法测定螨AChE活性.结果获得了相对分子质量(M)约为68×103的较高纯度的螨AChE蛋白,检测大部分为可溶性表达,酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性,并制备了107效价的抗螨AChE特异性抗体.采用重组AChE(IC50=5.4 mmol/L)检测毒扁豆碱抑制活性比螨粗酶液(IC50=58.7 mmol/L)灵敏度提高11倍.本研究构建了螨AChE体外高效表达载体并获得了具有较好活性的重组螨AChE,可为抗AChE杀螨剂的体外高通量筛选和以AChE为靶标的农药残留检测奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王有年		114	1712	23.0	37.0
2	师光禄		39	401	13.0	18.0
3	彭博		4	3	1.0	1.0
4	卜春亚		7	7	2.0	2.0
5	李金玲		4	3	1.0	1.0
6	冯晓姣		3	0	0.0	0.0
7	韩晶玉		4	3	1.0	1.0
8	高品		2	0	0.0	0.0