骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed基因的新方案

• 作者: 何丽 熊思东 肖晖
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 髓源巨噬细胞 LysM-cre floxed基因 基因敲除
• 年，卷（期）: 2015,（6）
• 所属期刊栏目: 生物学
• 页码范围: 898-903
• 分类号: Q813
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20150825.008

摘要

探索了在骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中有效地敲除oxed基因,更好地研究基因敲除引起的表型的新方案.由于传统方法往往导致floxed基因不能被LysM-cre酶高效地敲除,阻碍了BMDMs在一些遗传学方面的应用.通过调整培养基的更换时间,及时补充新鲜的M-CSF,使用胰酶消化分盘,有效地提高了细胞得率,并增强了基因在BMDM中的敲除效率.与传统方法相比,新方案将BMDMs得率增加了1倍,每只小鼠能获得接近5×107个BMDMs.新方案也显著性地提高了巨噬细胞中mTOR基因的敲除效率,从36.77％±5.07％提高到了76.9％±7.83％.新方案获得的LysM-cre/mTORfl/flBMDMs与mTORfl/flBMDMs相比,在应答LPS刺激方面出现了显著的表型差异,表达了更多的细胞因子IL-6和IL-12.在小鼠来源受限和需要提升巨噬细胞中特定基因敲除效率的情况下,本方案具有极为突出的优势,用少量的小鼠获得可靠的实验数据,也符合动物实验的“3R”原则.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖晖	中国科学院上海巴斯德研究所	44	480	8.0	21.0
2	何丽	苏州大学生物医学研究院	2	9	1.0	2.0
3	熊思东	苏州大学生物医学研究院	23	7	1.0	2.0