玉米籽粒蛋白质双向电泳技术体系的优化

• 作者: 冯勇 刘志雄 姜丽丽 张来厚 王云生 白海 石海波 苏二虎 赵瑞霞 高聚林 黄灵忠
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 页码范围: 171-176
• 页数: 6页
• 分类号: S513.03
• 字数: 4616字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2015.01.029

摘要

为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法，建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系，对酚抽提法、三氯乙酸／丙酮沉淀法（ TCA／丙酮沉淀法）和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析，并在相同条件下进行双向电泳比对分析，结果表明：可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富，最适合双向电泳研究；利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白，对第一向等电聚焦参数等条件，以及不同pH值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析，结果表明：采用pH值3～10的IPG预制凝胶条时，采取电压梯度上升的方式，总聚焦70000 Vhs、上样量800μg效果最佳，采用pH值4～7的IPG预制凝胶条时，总聚焦80000 Vhs、上样量900μg效果最佳，并且采用pH值4～7的IPG预制凝胶条相比pH值3～10的凝胶条能分离到更多的点，最后结合蛋白质点MALDI-TOF-TOF质谱鉴定分析，建立了一套适用于玉米籽粒的蛋白质双向电泳技术方法，即采用可溶性蛋白提取法提取蛋白，采用24 cm、pH值4～7的IPG干胶条，上样900μg电泳效果最佳，等点聚焦程序：500 V、1 h，1000V、1 h，2000 V、1 h，4000 V、2 h，8000 V、4 h，8000 V、80000 Vhs，500 V保持。试验研究为后续玉米籽粒发育差异蛋白研究奠定了技术基础。