酸碱"一步法"荧光PCR快速检测乙型肝炎病毒核酸

• 作者: 代俊 余敏 刘绪 周梦舟 唐景峰 张毅 程鹏飞 贾振华
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酸碱"一步法" 荧光PCR 乙型肝炎病毒
• 年，卷（期）: 2015,（12）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1297-1304
• 分类号: R373.2+1|Q789
• 语种: 中文

摘要

目的 建立酸碱"一步法"荧光PCR快速检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核酸.方法 对建立的酸碱"一步法"荧光PCR中的核酸释放剂组分及其浓度、释放时间,PCR缓冲液的组分、pH值及防污染体系进行优化.验证该方法的灵敏度及线性范围,与同类试剂盒进行比较,并应用于其他病原体的检测.结果 最佳核酸释放剂为:0.4 mol/L KOH,0.3％十二烷基硫酸锂(lithium lauryl sulphate,LLS),0.3％ Triton X-100,0.02％ FoamBan和0.5％N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC);最佳PCR缓冲液组分如下:0.5 mol/L Tris-醋酸(pH 7.4),1％甘油,2.5％海藻糖,1 mol/L KCl,0.5 mol/L MgC12,10 mmol/L EDTA、0.2％ BSA和0.01％ NaN3.建立的方法的最低检测量达1×102 copies/ml,在1×102～1 × 109 copies/ml范围内参考品浓度与Ct值呈良好线性关系,回归方程为:y=-3.36x+39.469 9,R2=0.999 9.该方法与同类试剂盒的检测结果差异无统计学意义(P＞0.05),不能用于检测解脲脲原体.结论 酸碱"一步法"荧光PCR可用于HBV核酸的快速检测,该方法操作简便、快速,抗污染及干扰能力强,具有较高的临床应用价值.