微小RNA-221／222海绵体载体的构建及验证

• 作者: 余东升 刘子锋 周李杰 欧阳颖 江方方 赵玮
• 来源期刊: 中华口腔医学研究杂志（电子版）
• 关键词: 微小RNA 海绵体载体 第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因 癌,鳞状细胞
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 106-112
• 页数: 7页
• 字数: 4560字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.02.004

摘要

目的：构建微小RNA（miR）-221／222海绵体载体并初步探讨其在口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞中的作用。方法利用miRNA海绵体技术设计合成含3个has-miR-221和3个has-miR-222反义序列的DNA片段，经酶切连入pDC316-mCMV-EGFP质粒载体，合成miR-221／222海绵体载体。将miR-221／222海绵体载体转染入OSCC细胞系UM1，检测转染效率，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测miR-221和miR-222表达水平，Western blot检测转染后PTEN蛋白表达水平，Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建miR-221／222海绵体载体，测序验证与设计序列完全一致；UM1各组细胞转染效率均在70％以上；实时荧光定量PCR显示，miR-221／222海绵体载体组miR-221和miR-222表达水平较pDC316质粒组和UM1细胞组明显降低（t1=111.69，P1=0.001；t2=6.98，P2=0.002；t3=236.55，P3=0.001；t4=22.06，P4=0.001）；Western blot显示，海绵体转染组较对照组PTEN蛋白水平表达明显升高；Transwell实验显示，海绵体转染组细胞侵袭能力较对照组减弱。结论实验成功构建了miR-221／222海绵体载体，并初步验证其对OSCC细胞侵袭性的抑制作用，为后续miR-221／222的功能研究奠定基础。