大豆小片段法HRM基因分型体系优化

• 作者: 姜振峰 张东雪 李文滨 滕卫丽 王艳 赵雪 韩英鹏
• 来源期刊: 中国油料作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 SNP HRM 基因分型 小片段法
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 453-461
• 页数: 9页
• 分类号: S565.103
• 字数: 5782字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7505/j.issn.1007-9084.2015.04.004

摘要

应用高分辨率熔解曲线（ high resolution melting curve，HRM）技术进行基因分型简单有效，灵敏度高、特异性强。优化并建立基于HRM的大豆SNP基因分型体系，是准确进行SNP研究的前提和基础。本研究利用添加内标后的小片段法进行SNP基因分型体系优化研究，结果表明在设计SNP引物时，最好使其PCR产物长度为50~80bp，熔解温度在72~82℃，Tm值介于55~62℃之间；10μL PCR反应体系中应包含25ng DNA模板，0.6pmol SNP引物，1μL LC Green染料；PCR反应后，应在各点样孔分别加入3pmol的高、低温内标，然后进行变性处理和HRM分析。同时利用建立的基因分型体系对重组自交系群体（ RIL）进行了基因分型检测，能完全将其分成亲本的两种基因型，提高了SNP基因分型的准确性和效率。本研究建立的SNP基因分型体系为今后进行大豆SNP标记开发、高密度遗传图谱构建、QTL定位等研究提供了基础。