四种猪呼吸道疾病综合征病原多重PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 张姜琳 李应国 杨俊 王国民 王昱 秦敏 聂福平 肖进文 陈玉燕
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 胸膜肺炎放线杆菌 猪肺炎支原体 多重PCR
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 339-344
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为建立同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、胸膜肺炎放线杆菌(APP)和猪肺炎支原体(M.hyo)的多重PCR方法,分别针对PRRSV的ORF1a基因、PCV2的ORF2基因、APP的OMLA基因和M.hyo的P46基因的保守区域设计4对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了可同时扩增PRRSV(225 bp)、PCV2(337 bp)、APP(107 bp)、M.hyo(176 bp)相应基因的四重PCR方法.结果显示,该方法能单管同时特异地鉴别检测PRRSV、PCV2、APP、M.hy0 4种病原体,对猪瘟病毒、副猪嗜血杆菌、猪呼吸道冠状病毒、猪流感病毒、猪细环病毒及猪细小病毒等无特异性扩增,说明该PCR具有良好的特异性;方法的灵敏度分别为195、272、241、321 pg/μL.应用该方法对重庆市的61份样品进行检测,其中PRRSV、PCV2、APP、M.hyo的阳性率分别为22.9％(14/61)、18.0％(11/61)、8.2％(5/61)和18.0％(11/61).该方法的建立为临床上4个病原的快速鉴别诊断提供了有力的技术手段.