S100PshRNA慢病毒载体的构建及其对胃癌MGC-803细胞生物学行为的影响

• 作者: 张齐 汤文浩 石欣 胡浩霖
• 来源期刊: 东南大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: S100 P shRNA 慢病毒 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 65-70
• 页数: 6页
• 分类号: R735.2
• 字数: 3982字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6264.2015.01.015

摘要

目的：：构建针对S100P基因的shRNA慢病毒载体,并在胃癌MGC-803细胞上鉴定沉默效率,观察其对细胞生物学行为的影响。方法：筛选的S100P基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,并与GV115-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,与pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染293T细胞,产生慢病毒。用病毒感染MGC-803细胞,RT-PCR和Western blot检测靶基因的沉默效率、克隆形成情况、细胞周期变化和凋亡实验观察靶基因沉默对MGC-803的影响。结果：构建的重组shRNA慢病毒载体,经293T细胞包装获得病毒颗粒,和阴性对照相比,慢病毒感染组S100 P mRNA表达下降了83.4%,蛋白表达也明显受到抑制。 S100 P沉默后MGC-803的克隆形成能力明显减弱,细胞周期发生S期阻滞,细胞凋亡明显增加。结论：成功地构建了S100P基因shRNA慢病毒表达载体,该载体能够在MGC-803细胞中沉默S100P基因的表达,导致胃癌细胞克隆形成能力降低,细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,表明S100 P基因有可能具有影响胃癌发生发展的作用。