骨形成蛋白-7对多孔钽／软骨细胞复合物分泌功能以及 Col-Ⅱ、AGG 和 Sox9基因表达的影响

• 作者: 张辉 李亮 李琪佳 毕成 王志强 王茜 王辉 甘洪全
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: 骨形态发生蛋白7 钽 软骨细胞 胶原Ⅱ型 葡糖氨基聚糖类
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 219-225
• 页数: 7页
• 分类号: R684
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-167X.2015.02.006

摘要

目的：研究人重组骨形成蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）对国产多孔钽／软骨细胞复合物中软骨细胞分泌功能以及Ⅱ型胶原（ typeⅡcollagen，Col-Ⅱ）、蛋白聚糖（ aggrecan，AGG）和SRY相关高迁移率组基因9（SRY-related high mobility group-box gene 9，Sox9）mRNA表达的影响。方法：3周龄新西兰幼兔，取双膝关节软骨细胞分离培养及鉴定，将生长状态良好的第2代细胞以1×106／mL浓度接种于多孔钽并给予不同浓度BMP-7，分为对照组（多孔钽／软骨细胞组）、50μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组、100μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组及200μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组。 CCK-8法检测不同浓度BMP-7对多孔钽／软骨细胞生长及增殖的影响，扫描电镜观察各组软骨细胞在多孔钽表面及内部生长情况，二甲基亚甲蓝（ dimethyl methylene blue，DMMB）比色定量法对BMP-7／多孔钽／软骨细胞复合物糖胺多糖（ glycosaminoglycan，GAG）进行定量检测，实时荧光定量PCR检测Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA的表达。结果：原代软骨细胞培养24 h后呈梭形生长，4 d后细胞呈多角形，胞浆丰富。阿辛蓝（ alcian blue）、番红O（ safranin O）、Col-Ⅱ免疫细胞化学染色均呈阳性反应。 CCK-8法细胞增殖检测结果显示，100μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组细胞增殖水平高于其他各组（ P＜0．05）。扫描电镜示各组软骨细胞在多孔钽表面生长状态良好，细胞有多个突起、伸展、叠层生长并覆盖于多孔钽表面。 GAG定量检测显示，100μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组GAG含量比其他各组均明显升高（ P＜0．05）；实时荧光定量PCR检测显示，各实验组Col-Ⅱ、AGG和Sox9 mRNA表达量均高于对照组，以200μg／L BMP-7／多孔钽／软骨细胞组升高最为明显（ P＜0．05）。结论：BMP-7／多孔钽／软骨细胞复合体能促进体外软骨细胞增殖及细胞外基质的分泌，促进软骨基因的表达。