靶向人表皮生长因子受体3的人源Fab抗体构建及鉴定

• 作者: 万德有 付洁 刘玉杰 刘蕴慧 宋海峰 张晶 武逸熏 王芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 人表皮生长因子受体3 Fab抗体 亲和力 293E细胞
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 595-599
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3918字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2015.05.001

摘要

目的:制备靶向人表皮生长因子受体3(HER3)的全人源Fab型抗体,并对其亲和力及生物学活性进行鉴定.方法:用BspQ Ⅰ限制性内切酶分别将靶向HER3的全人源抗体的完整轻链、重链的可变区全长和CH1恒定区插入载体p3457,构建重组质粒;通过将轻、重链质粒瞬时共转染293E悬浮细胞进行表达,并利用镍柱纯化得到Fab型抗体蛋白;采用ELISA鉴定其与HER3胞外区是否结合,ForteBio实验鉴定其亲和力,CCK8检测其对MDA-MB-453细胞增殖能力的影响.结果:分别获得表达轻链全长、重链可变区全长及CH1恒定区的HER3抗体重组质粒,并通过瞬时共转染293E悬浮细胞获得分泌型HER3 Fab抗体;ELISA实验证明其可与HER3胞外区蛋白直接结合;ForteBio买验证明Fab型抗体与人源HER3胞外区蛋白具有一定的亲和力(KD=1.08× 10-8 mol/L);体外增殖实验表明,该抗体可显著抑制MDA-MB-453体外增殖.结论:通过293E悬浮细胞表达、镍柱亲和纯化,获得具有较高亲和力和功能活性的HER3 Fab型抗体,为HER3高表达型癌症的诊断、治疗提供物质基础.