柔嫩艾美耳球虫Serpin基因在293T细胞中的表达

• 作者: 姜连连 朱顺海 王晔 舒凡帆 董辉 薛璞 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 复旦学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 Serpin基因 293T细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 252-256
• 分类号: S858.31
• 语种: 中文

摘要

为了检测柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,Et)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因(EtSerpin)在真核细胞293T中的表达情况,以Et孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增含完整Serpin开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM-Teasy载体,构建pGEM-Teasy-EtSerpin质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtSerpin.该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞,用间接免疫荧光法和Western blot鉴定EtSerpin基因的表达情况,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光,Western blot结果显示出大小约45.5 kDa的目的蛋白条带,结果表明构建的EtSerpin可以在293T细胞中获得表达.