柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2基因真核表达载体的构建及在293T细胞中表达

• 作者: 姜连连 朱顺海 王晔 舒凡帆 董辉 薛璞 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 棒状体颈部蛋白2 293T细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 39-44
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 字数: 3174字
• 语种: 中文

摘要

为构建柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2（Eimetiatenellarhoptryneckprotein2，EtRON2）基因的重组质粒pCAGGS-EtRON2，并转染293T细胞进行表达，以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板，经PCR扩增其核心编码区的一部分，将其克隆至pGEM-Teasy载体，构建pGEM-Teasy-EtRON2质粒，双酶切出目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接，构建真核表达质粒pCAGGS-EtRON2。该重组质粒经酶切和测序鉴定后转染293T细胞进行表达，分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtRON2基因的表达情况。所构建的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2经过双酶切鉴定，可见一条大小约为1172bp的目的条带，测序结果与GenBank所登录序列完全一致；免疫印迹实验可见大小约为43kDa的目的蛋白条带，间接免疫荧光实验可以检测到特异性红色荧光。研究结果表明已成功构建了EtRON2的真核表达质粒pCAGGS-EtRON2，并在真核细胞中获得表达，为深入研究EtRON2的生物学功能奠定了基础。