柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究

• 作者: 姜连连 朱顺海 王晔 舒凡帆 董辉 薛璞 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 钙依赖蛋白激酶3基因 293T细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 字数: 3554字
• 语种: 中文

摘要

为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3（Eimeria tenella calcium-dependent protein kinases 3, EtCDPK3）基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3，并转染293T细胞进行表达，以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板，经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列，将其克隆至pGEM-T easy载体，构建pGEM-Teasy-EtCDPK3重组质粒，双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接，构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达，分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3经过双酶切鉴定，可见1条大小约为1302 bp的目的条带，测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致；Western blot结果可见大小约为49 kDa的目的蛋白条带，间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3，并在真核细胞中获得表达，为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。