柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶4酵母双杂交诱饵质粒的构建与检测

• 作者: 夏伟丽 朱雪龙 朱顺海 李聪 王自文 董辉 赵其平 门启婓 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 钙依赖蛋白激酶 诱饵质粒 自激活作用 细胞毒性
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 62-69
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723
• 字数: 6105字
• 语种: 中文

摘要

为了筛选出柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶（EtCDPK4）在虫体内发挥作用时的作用受体即相互作用蛋白，构建了能够应用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库的诱饵重组质粒pGBKT7-EtCDPK4，本研究以柔嫩艾美耳球虫子孢子为材料，提取了总RNA，经反转录得到cDNA第一链，利用PCR的方法扩增获得了该基因大小为1660 bp的EtCDPK4的功能区片段，并将其连接于酵母BD诱饵pGBKT7载体上，经双酶切鉴定和序列分析，以及检测了pGBKT7-EtCDPK4在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性和表达情况。结果显示，成功构建了酵母双杂交诱饵重组质粒pGBKT7-EtCDPK4，在酵母双杂交系统中没有自激活活性和细胞毒性，且在酵母细胞Y2HGold中能够进行表达。表明所构建的诱饵质粒pGBKT7-EtCDPK4可以应用于酵母双杂交系统中，用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库，获得可能与EtCDPK4具有相互作用的蛋白质。