柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及在细胞中的表达

• 作者: 朱顺海 李莎 杨亮宇 杨斯涵 梁思婷 翟颀 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 沉默信息调节因子2 DF-1细胞 BHK细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 寄生虫
• 页码范围: 53-59
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 4200字
• 语种: 中文

摘要

为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pC AGG s连接.连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况.结果表明:成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp;Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带;间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了EtSIR2的真核表达质粒pCAGGs-EtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达.该研究结果为深入研究EtSIR2的生物学特性和球虫DNA疫苗的研制打下了基础.