柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析

• 作者: 姜连连 孔春林 朱顺海 李婷 王晔 舒凡帆 董辉 薛璞 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 球虫 柔嫩艾美耳球虫 真核起始因子3d 毕赤酵母 真核表达
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 分类号: S852.723
• 字数: 3856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2012.02.008

摘要

在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d（Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d）基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。