柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

• 作者: 吴有陵 朱顺海 李榴佳 王艳歌 董辉 赵其平 韩红玉 黄兵
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 乳酸脱氢酶 IFN-γ基因 293T细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 页码范围: 65-71
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 字数: 5059字
• 语种: 中文

摘要

为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶（Eimeria tenella Lactate dehydrogenase，EtLDH）的真核表达质粒，分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板，PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因，PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接，构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达，分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带，间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ，并能在真核细胞中表达，为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。