柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达

• 作者: 吕敏娜 吴彩艳 吴玄光 孙铭飞 廖申权 戚南山 李娟 陈佳
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 二氢乳清酸脱氢酶 电子克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 35-38
• 页数: 4页
• 分类号: S852.723|Q785
• 字数: 3285字
• 语种: 中文

摘要

二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点.本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger,ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列.构建重组表达载体pCold Ⅰ-EtDHODH,进行原核表达.测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1254 bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45 ku.本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础.