新疆肉用绵羊颗粒细胞抑制素βA基因RNAi载体的构建及其干扰效率验证

• 作者: 刘贤侠 杨华 林杉 田占伟 赵宗胜 陈宝麒
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 抑制素βA基因(INHβA) 绵羊 RNA干扰(RNAi) 卵巢颗粒细胞
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1345-1352
• 分类号: S814.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2015.08.27

摘要

抑制素βA基因(inhibin-3A,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系.为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达.根据GenBank上绵羊IN HβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3 (I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量.结果显示,4个干扼载体的干扰效率依次为34％,58％,39％,19％,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好.通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量.结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵宗胜	石河子大学动物科技学院	183	1072	16.0	23.0
2	刘贤侠	石河子大学动物科技学院	123	374	9.0	11.0
3	田占伟	石河子大学动物科技学院	6	16	3.0	3.0
4	林杉	石河子大学生命科学学院	5	17	3.0	4.0
5	陈宝麒	石河子大学动物科技学院	1	1	1.0	1.0