目的:通过分离和培养 BALB/ C 小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),制备用于大鼠精原干细胞(SSCs)培养的饲养层。方法从胎龄为12.5~14.5 d 的胎鼠中分离 MEF,经不同浓度(5、10、15 mg/ L)丝裂霉素 C 处理不同时间(1.5、3、4.5 h),应用噻唑蓝(MTT)法测定其增殖活性。将大鼠 SSCs 接种到最佳饲养层上培养,观察细胞生长情况。结果从胎龄为12.5~14.5 d 的胎鼠中分离培养的 MEF 数量多,增殖快。常温下,经0.25%胰酶(含0.04% EDTA)处理2~3 min 细胞增殖状况良好。经10 mg/ L 丝裂霉素 C 处理3 h MEF 增殖不明显,与0 d 比较差异无统计学意义(P >0.05)。结论12.5~14.5 d 是分离培养小鼠 MEF 的最佳胎龄,10 mg/ L 丝裂霉素 C 作用3 h 对 MEF 的增殖具有良好的抑制作用,有利于大鼠 SSCs 的培养。