定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价

• 作者: 倪崖 徐万祥 曾杰 李坤 邱枫 陈爱君
• 来源期刊: 中国应用生理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CFTR蛋白 CFTR多克隆抗体 生物素-亲和素ELISA
• 年，卷（期）: 2015,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 154-157
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33
• 字数: 3239字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13459/j.cnki.cjap.2015.02.016

摘要

目的:建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的生物素-亲和素ELISA(BA-ELISA)方法并评价其可靠性.方法:优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等.结果:CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体最适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,最佳封闭液为1％ BSA-PBST,抗原与包被抗体最佳反应时间60 min,底物显色最佳时间15 min.批内、批间变异系数分别为2.16％ ～ 9.23％和2.29％ ～ 11.71％,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,最低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962.结论:成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈爱君	浙江省医学科学院生殖医学研究中心	20	111	3.0	10.0
2	李坤	浙江省医学科学院生殖医学研究中心	14	32	4.0	4.0
3	徐万祥	上海计划生育研究所国家人口和计划生育避孕药物重点实验室	1	0	0.0	0.0
4	倪崖	温州医科大学检验医学院	1	0	0.0	0.0